Problémy s tesnením a kontamináciou v doskách s viacerými bunkovými kultúrami

Nakladanie a manipulácia s viacjamovými bunkovými kultúrnymi doskami:

Doska bunkovej kultúry tiež sleduje princíp prísnej asepsy pri vykonávaní bunkových operácií. Všetky operácie musia byť štandardizované a vedecké a nebudú mať ďalší vplyv na rast buniek. Najbežnejším problémom je, ako zabezpečiť rovnomernosť buniek po pridaní vzorky a minimalizovať vplyv zmeny média na rastový stav buniek.

opýtať sa:
Viece 96 a 24-jamkových kultúrnych tanierov alebo Petriho misky sú veľmi voľné, čo je vhodné na ventiláciu, ale vkĺznú aj baktérie, plesne a ďalšie znečisťujúce látky?

Odpoveď:
Veko je veľmi voľné, ktoré patrí do polootvorenej kultúry, a účelom toho je vetranie (v skutočnosti je to, aby sa CO2 mimo kultivačného misky úplne vymieňali s kultúrnym miskou a zachovali hodnotu pH kultúry médium).
Všetko má výhody a nevýhody, čo samozrejme zvyšuje možnosť znečistenia. Okrem toho to spôsobuje odparovanie tekutiny v miske, čo je pozoruhodné presným dávkovaním liekov. Preto sú potrebné dve opatrenia: a. Vzduch v inkubátore musí byť čistý (pravidelné ultrafialové svetlo, čistenie alkoholu a inkubátor by sa mal otvoriť a zatvoriť čo najmenej) b. Vlhkosť v inkubátore sa musí vždy udržiavať na 100% (umývadlo so sterilnou destilovanou vodou umiestnenou v inkubátore).
Rovnako ako Petriho misa, je to tiež nádoba s vekom hore nohami a nebude znečistená. Hlavne z dôvodu záporného tlaku prúdu vzduchu generovaného „L“ okrajom krytu sú mikroorganizmy pripevnené k prachu a prach prenášaný prúdom vzduchu nemôže prejsť okrajom krytu, ktorý vytvára negatívny tlak. Ventilačný efekt je iba difúziou vzduchu a nebude sa generovať žiadny prúdenie vzduchu, takže iba dýcha a neprenikne baktérie.

opýtať sa:
Pomocou 24-jamkovej doštičky existujú operácie v niektorých studniach (v ultra čistej lavičke) a v iných jamkách sa kultivujú bunky. Obávam sa, že to spôsobí kontamináciu. Neviem, čomu mám venovať pozornosť?

Odpoveď:
Ak je operácia štandardizovaná v lavičke Ultra Clean, mala by byť v poriadku. Myslím, že môžete plne využiť kryt kultúrneho taniera, pokúsiť sa odhaliť iba diery, ktoré sa majú prevádzkovať, a pokryť ostatné diery krytami.
Pred použitím zvážte komplexne a plne využívajte všetky diery; Ak potrebujete iba niekoľko dier, môžete použiť iba jednu stranu a zvyšok zakryť krytom. Najprv som zvyknutý používať pravý otvor (je vhodné pridať vzorky do pravej ruky).

Pri prevádzke použite niekoľko sklenených snímok na zvýšenie jednej strany dosky, neotvorte kryt úplne, zvyčajne žiadny problém.
Nerovnomerné rozloženie buniek a riešenia

opýtať sa:
Bunky sú naočkované na kultivačnej doske a bunky sa vždy zhromažďujú v periférnej časti, ako sa s ňou vysporiadať?

Odpoveď:
Môžem sa spýtať, ako sú vaše bunky zmiešané? Je to pipetovanie alebo otrasenie kultivačnej dosky? Ak je to druhé a ak sa otrasie v kruhu, je veľmi pravdepodobné, že bunky budú hodené do periférnej časti v dôsledku odstredivej sily, čo bude mať za následok menej buniek v strede. Viac ako štyri týždne!
Tu je dobrý spôsob: pred kultiváciou dosky na semená vložte kultivačný tanier do inkubátora na niekoľko hodín saturácie a potom ju vyberte. Sila by mala byť pri výsadbe buniek svetla. Pridanie pomaly umožňuje, aby sa bunková suspenzia prúdila do jamiek doštičky a kultivované bunky v podstate rastú rovnomerne. Nezabudnite, že sa nikdy netriasi s trepačkou, inak sa vaše bunky zhlukujú, ako ste povedali.
Čím menší je priemer otvoru kultivačnej dosky, tým je zrejmejší tento jav. Tento jav je nevyhnutný pre 24 a 96-jamkové doštičky, pretože tekutina prilepí na stenu, takže roztok kultúry v studni nevytvára hladinu kvapaliny, ale okraj je vysoký, rovnako ako konkávne zrkadlo. Pri použití týchto dvoch druhov otvorov nie je však možné pridať dostatočné množstvo kultivačného roztoku kvôli potrebe ďalšieho zásahu, takže bunky sa objavia „zber okrajov“ spolu s roztokom kultúry. Závisí to od toho, aké ukazovatele musíte pozorovať. Ak je to MTT, imunohistochémia ovplyvní výsledky v dôsledku vrstvenia buniek.
Pri trávení buniek rovnomerne venujte pozornosť pipetovaniu, aby ste sa vyhli zhlukovaniu buniek, a by malo byť dostatočné množstvo kultivačného roztoku v studni. Pri inokulácii vo všeobecnosti pridajte dostatok kultivačného roztoku a pri pridávaní intervencie zmeňte riešenie. Množstvo kultivačného roztoku pridaného do intervenčného roztoku sa rovná množstvu kultivačného roztoku v čase očkovania, v tomto prípade sa vylepší jav „sada okrajov“, takže by ste to mohli vyskúšať.

opýtať sa:
Urobil som experiment s tvorbou plaku. Najlepšie je šíriť bunky v jednotnej vrstve. Väčšina dier je v poriadku, keď je vírus naočkovaný a niektoré z nich nie sú jednotné. V bunkovej skupine sú veľké rozdiely. Chcel by som sa vás opýtať, akú metódu používate pri pridávaní buniek?

Odpoveď:
Je dôležité, aby sa bunky po trávení pipetovali do jednorazovej suspenzie! Uistite sa, že počet buniek v každej jamke je pri rozdeľovaní dosky konzistentný!
Existujú samozrejme aj faktory spracovania. Paralelizmus medzi studňami je tiež veľmi dôležitý. Napríklad pri pridávaní medicíny zmiešajte liek po riedení, aby ste zaistili, že koncentrácia každej jamky je konzistentná!
Ďalej, pri pridávaní buniek a liečiv by sa testovacia skupina a kontrolná skupina mali zase pridať, aby sa zabránilo rozdielu v hustote buniek a koncentrácii liečiva spôsobeného sekvenciou pridávania vzoriek!

opýtať sa:
Fúkanie je už jednotné, ale doska, 6 jamiek a 24 jamiek je vždy trochu nerovnomerné a trochu sústredené uprostred. Okrem toho je zrejmé, že počítanie sa vykonáva a po dni alebo dvoch je hustota každého otvoru iná, čo ovplyvní detekciu. Existuje dobrý spôsob?

Odpoveď:
Ak používate pipetu pasteur, nezakaždým sa príliš veľa nenesie, pretože bunky v pipette automaticky klesnú, často je počet buniek v prvých niekoľkých dierách veľký a bunková suspenzia je často rovnomerná a kvapalina bude Postupujte podľa trasy v tvare S.
Ak používate pipetu, špičky by sa mali spracovať a odstrániť, aby sa zabránilo poškodeniu buniek, takže zakaždým, keď sa tekutina odobrala, zodpovedá jamke. Je presnejšie pridať otvor na jeden na jedného s tipom. Ale venujte tiež pozornosť zmiešaniu pozastavenia.

Na nastavenie paralelnej skupiny musí byť N dostatočne veľká (môžete ju vypočítať).

Po pokovovaní sa netriasajte, pretože trasenie spôsobí, že sa bunky budú agregovať smerom do stredu. Najlepšie je doska raz.

Plate s poréznou bunkovou kultúrou Yongyue Medical vždy považovala kontrolu kvality za životnosť podnikania a sledovala neustále zlepšovanie podnikovej konkurencieschopnosti. Spoločnosť sa vždy dodržiava podnikového ducha zákonov a nariadení o dodržiavaní, je prísna so sebadisciplínou, je zhovievavá a odváži sa prevziať zodpovednosť ako štandard v prevádzke, udržiavať a rozširovať trh s vynikajúcou kvalitou a vynikajúcimi službami a splniť Potreby zákazníkov v najväčšej miere. . Našim vývojovým cieľom je obojstranne výhodný. Yongyue Medical! Váš dôveryhodný partner. Sme ochotní s vami úprimne spolupracovať, aby sme vytvorili lepšiu budúcnosť.