Podrobné vysvetlenie prchavosti činidla v experimentoch PCR

Podrobné vysvetlenie prchavosti činidla v experimentoch PCR.

V experimente PCR po pridaní reakčného systému opatrne pokryjeme veko a opakovane potvrdzujeme, že veko je uzavreté, aby sa zabránilo volatilizácii činidla. Ale niekedy máme pochybnosti: potvrdili sme, že veko je pevne zatvorené, ale po dokončení experimentu sa činidlo stále odparuje. Aky je dôvod?

V skutočnosti je prchanie činidla jedným z najbežnejších problémov v experimentoch PCR a existuje veľa faktorov, ktoré ovplyvňujú prchanie činidla.

Odparovanie sa vzťahuje na to, že počas experimentu PCR sa reakčný roztok odparuje pri vysokej teplote a potom kondenzuje na stene fľaše alebo horného krytu, aby sa vytvorila vodná hmla alebo kvapôčky vody alebo priamo preteka z vzduchovej medzery vo fľaši alebo filme, čo vedie k tomu. Pri zmene koncentrácie reakčného roztoku. Zmeny, množstvo reakčného roztoku sa znížilo a niektoré sa dokonca odparili do suchosti, čo malo za následok neplatné experimenty.

1. Tlak horúcich veka, teplota

V experimentoch PCR zvyčajne zahrievame veko, aby sme zabránili kondenzácii pary reagencie. Teplota zahrievaného veka je zvyčajne vyššia ako teplota reakčného roztoku, aby sa zabránilo kondenzácii výparov.

Termálne vykurovacie viečka na tepelné cyklovanie sa môžu zhruba rozdeliť na tieto štyri typy: nevyriešiteľné vykurovacie viečka, nastaviteľné vykurovacie viečka, adaptívne vykurovacie viečka a automatické vykurovacie viečka. Nastaviteľné vyhrievané veko má kompresiu tesniaceho prsta. Ak nie sú pevne utiahnuté, reagencie sa odparia. Odparovanie okrajov sa dá minimalizovať zvýšením tlaku na vyhrievané veko. Niekedy nadmerné nastavenie môže trubicu prilepiť a otočiť gombík. Za normálnych okolností môže elektrický inteligentný vykurovací kryt automaticky zistiť spotrebné materiály v rôznych výškach, automaticky komprimovať spotrebný materiál a tlak je jednotný a konštantný, čím sa znižuje odparovanie činidiel a manuálne chyby a zlepšuje experimentálnu presnosť a opakovateľnosť.

2. Deformácia spotrebného materiálu

V prípade úniku pary si väčšina ľudí myslí, že tlak horúcich veka nestačí. Tlak horúceho veka je veľmi dôležitý, ale to je iba jeden aspekt. V skutočnosti sú spotrebné materiály tiež veľmi dôležité.

Doštičky Orifice PCR sú zvyčajne vyrobené z plastových materiálov, ktoré sa po zahriatí veľmi rozširujú a veľmi deformujú. Rýchlosť tepelnej expanzie kovovej bázy PCR použitá na umiestnenie dosky Orifice PCR je extrémne nízka a doska Orifice PCR sa po tepelnej expanzii nemôže normálne rozširovať pozdĺž roviny. Vďaka vydutiam stavu je horný tepelný kryt, ktorý nie je schopný úplne kontaktovať povrch dosky Orifice PCR, čo vedie k nerovnomernej teplote a tlaku, čo spôsobuje odparovanie činidla na okraji dosky Orifice PCR a ovplyvňuje účinok detekcie PCR.

3. Spotrebný materiál nie je pevne zapečatený

Pevnosť tepelného veka a spotrebného materiálu neznamená, že uzáver trubice PCR je pevne zatvorený a kvalita dosky PCR studne je nerovnomerná. Vysoko kvalitné spotrebné materiály, povrch dýzy a krytu sú hladké a tesnenie za krytom krabice je dobré a nie je ľahké uniknúť. Nižšie spotrebné materiály majú nerovnomerné výtoky a radiálne vedenia, ktoré môžu ľahko spôsobiť únik alebo dokonca vyschnúť.

Preto sa v experimentoch PCR pokúste zvoliť vysoko kvalitný a vhodný spotrebný materiál. Zároveň sa môže reakčný systém rozšíriť, aby sa minimalizoval vplyv odparovania systému na reakciu.