Základné tipy na kryokonzerváciu bunkových kultúr

Základné tipy na kryokonzerváciu bunkových kultúr

Bunky pokračujú vo svojom metabolizme počas normálnych rastových aktivít, čo si vyžaduje účasť rôznych proteáz. Keď teplota klesne pod -70 ° C, proteázy prestanú fungovať. Preto v prostredí s extrémne nízkymi teplotami môžu bunky zastaviť svoje metabolické aktivity a vstúpiť do spiaceho stavu, ktorý umožňuje dlhodobé skladovanie.

1. Experimentálne materiály

Základný materiál:

Základné kultúrne médium

Sérum (konvenčné FBS/NBS)

Pracovný stôl

Sterilný dimetylsulfoxid (DMSO)

Sterilný roztok soľného roztoku fosfátu PBS fosfátu

Pištoľ

Elektrická pištoľ

Príprava experimentov

a) Príprava riešenia mrazu:

Všeobecné bunky: 55% bazálne médium + 40% hovädzie sérum (FBS/NBS) + 5% DMSO

Vital Bunky: 90% hovädzie sérum (FBS/NBS) + 10% DMSO

Alikvot pripravený kryokonzervačný roztok do 15 ml centrifugačnej trubice [Nest] a skladujte pri 4 ° C na neskoršie použitie.

b) Príprava buniek na zmrazenie:

Pred zmrazením buniek vyberte bunky s dobrým stavom rastu a vo fáze logaritmického rastu a nahradte ich čerstvým médiom 12-24 hodín pred zamrznutím, aby ste udržali stav buniek.

2. Experimentálny postup

1. Pozorujte hustotu buniek, ktoré sa majú zmraziť, čo je asi 80%~ 90%. Na ašpiráciu starého média použite pištoľ, pridajte sterilné PBS na premytie buniek 1-2 krát a odstráňte zvyšné médium v ​​kultúrnom prostredí.

2. Pridajte vhodné množstvo trypsínu alebo tráviacej šťavy, aby sa trypsín umožnil vstúpiť do buniek, a umiestnite ich do inkubátora na trávenie. Pozorujte stav buniek pod mikroskopom: cytoplazma sa stiahne a bunky už nie sú pripojené do listov. V tomto bode pridajte zastavovacie riešenie, aby ste zastavili proces trávenia.

3. Jemne bublinujte bunky špičkou, aby sa vytvorila bunková suspenzia a centrifúziu bunkovej suspenzie pri 1 000 ot./min. Počas 3-5 minút.

Zlikvidujte supernatant, pridajte vhodné množstvo zmrazovacieho roztoku a jemne pipette, aby sa bunky stali rovnomerným počítaním. Upravte hustotu buniek kryokonzervačným médiom, aby sa konečná hustota stala 5 × 106/ml ~ 1 × 107/ml.

4. Na oddelenie kryogénnych skúmaviek podľa očakávanej kapacity použite pištoľ na pištoľ a na uzáver a utesnenie použite automatický kryt.

5. Štandardný program kryokonzervácie je rýchlosť chladenia -1 ° C až -2 ° C/min a bunky, ktoré sa majú zmraziť 20 ° C (30 minút) → -80 ° C ° C (cez noc) → Dlhodobé skladovanie v kvapalnom dusíku.

Môže sa tiež skladovať priamo v mrazničke pri -80 ° C cez noc a potom sa preniesť na kvapalný dusík na skladovanie.

Yongyue Medical je high-tech podnik, ktorý sa špecializuje na výskum a vývoj, výrobu a predaj biomedicínskych spotrebných materiálov. Pipové špičky, pipety, PCR doska, produkty bunkovej kultúry a ďalšie biologické laboratórne spotrebné materiály. Yongyue Medical si zaslúži vašu dôveru a výber! Vitajte na konzultácii!